Prova de retrovirus

Mètodes de detecció

Principis del mètode

Enfocament regulador

Assaig de cocultiu

Aquest mètode utilitza cèl·lules indicadores sensibles per capturar partícules virals infeccioses i determina l'estat de contaminació mitjançant l'observació de fenòmens com ara efectes citopàtics, formació focal o expressió d'antigen específic. Pot demostrar la presència de partícules retrovirals infeccioses.

• Objectius de prova obligatoris: cèl·lules EOPC o cel·les de producció-de pas limitat.

• Procediment de prova bàsica: s'ha d'utilitzar un sistema de co-cocultura de dues etapes (fase d'amplificació viral i fase d'indicador d'activitat).

• Requisits de cèl·lules sensibles: segons l'espècie i l'origen de les cèl·lules que s'estan provant, s'han d'utilitzar línies cel·lulars sensibles diferents o múltiples per als assajos d'infectivitat retroviral.

• Requisits de pas de cultiu: el sistema de co-cultiu s'ha de passar almenys 5 vegades (normalment més) per garantir una amplificació adequada del virus potencial.

Microscòpia electrònica de transmissió

Aquest mètode utilitza la microscòpia electrònica de transmissió d'alta -resolució per observar directament la morfologia i l'estructura de les partícules virals (com l'estructura típica de l'embolcall icosaèdric i la morfologia de la nucleocàpsida), que permet la identificació visual i l'anàlisi quantitativa. Pot detectar partícules víriques conegudes i desconegudes, incloses partícules que no es-replican o que no es capturen mitjançant assajos d'infectivitat.

• Objectius de prova obligatoris: cèl·lules EOPC o cel·les de producció-de pas limitat.

• Requisit bàsic: s'ha d'identificar el tipus i la quantitat de partícules retrovirals.

• Requisits de la mostra: es requereix un seccionament ultrafina, que normalment requereix l'observació sistemàtica d'almenys 200 cèl·lules.

• Disposicions especials (Farmacopea xinesa 2025): Per a determinades cèl·lules de rosegadors (per exemple, CHO, BHK-21) o cèl·lules d'insectes, també s'ha de determinar la quantitat de partícules víriques al líquid de la collita i la seva infectivitat.

Assaig de transcriptasa inversa

A partir de la característica de la transcriptasa inversa que catalitza la síntesi d'ADN a partir d'una plantilla d'ARN, la presència de retrovirus es pot determinar indirectament detectant els senyals radioactius o fluorescents dels productes de la reacció per quantificar l'activitat enzimàtica. Aquest mètode és independent de la infectivitat viral i pot detectar àmpliament partícules virals amb activitat enzimàtica.

• Explicació de l'exempció: tant l'ICH Q5A(R2) com la Farmacopea xinesa (edició 2025) indiquen clarament que aquesta prova no és necessària per a les cèl·lules que se sap que produeixen retrovirus (com algunes cèl·lules de rosegadors, insectes i aus).

• Requisits alternatius: En els casos d'exempció, s'ha de realitzar una prova més completa del tipus, la quantitat i la infecciositat de partícules del virus.

PCR o altres mètodes específics in vitro

En funció de l'especificitat d'espècie de les cèl·lules, quan els resultats de l'activitat de la transcriptasa inversa no són clars o no es poden mesurar, es poden utilitzar mètodes de detecció de retrovirus específics d'espècie, com ara PCR de retrovirus, immunofluorescència, ELISA, etc. La PCR quantitativa de retrovirus també es pot utilitzar per quantificar partícules de retrovirus.

• Posicionament primari: s'utilitza habitualment com a complement important dels mètodes bàsics esmentats anteriorment i com a eina per confirmar l'especificitat.

• Escenaris d'aplicació: s'utilitza habitualment per a la detecció i quantificació d'alta sensibilitat de virus específics coneguts (p. ex., qPCR) o per proporcionar proves a nivell molecular-quan els resultats de la microscòpia electrònica/infectivitat són qüestionables.

• Bases normatives: la seva aplicació requereix una validació exhaustiva i ha de complir les directrius pertinents per a la validació de mètodes de detecció específics en el mercat objectiu (per exemple, la Farmacopea Xinesa (edició 2025)).

Serveis professionals

Protecció integral per a vostè

Enfocament de compliment global

Els nostres mètodes de prova estan profundament integrats amb els requisits bàsics d'ICH Q5A(R2), Farmacopea xinesa (2025), USP i EP, proporcionant un servei únic-que inclou proves d'infecció, microscòpia electrònica de transmissió (TEM) i detecció d'activitat de transcriptasa inversa, donant suport eficient a l'aplicació simultània a la Xina, a diverses regions dels EUA i Europa.

Capacitat de detecció{0}}ampli d'espectre

Tenim una varietat de línies cel·lulars sensibles i mètodes madurs per a diferents escenaris de risc, que poden detectar eficaçment patògens diana, inclosos retrovirus murins, retrovirus de tropisme i retrovirus d'insectes, garantint l'ampli espectre i l'especificitat de la detecció.

Plataforma de microscòpia electrònica pròpia

Tenim el nostre propi microscopi electrònic de transmissió d'alta-resolució i un equip tècnic professional sènior per aconseguir un control de qualitat-tancat durant tot el procés, des de la preparació de la mostra fins a la sortida de dades. També podem oferir serveis quantitatius ràpids per a matèries primeres (UPB) per donar suport amb precisió a la verificació d'eliminació de virus aigües avall.

Validació integral del mètode

Tots els mètodes es realitzen segons els estàndards GMP/GLP, seguint estrictament la Farmacopea Xinesa (edició 2025) i ICH Q2(R2) per a una validació completa de l'especificitat, els límits de detecció, etc. Oferim una gestió de projectes de cicle complet-des del disseny del protocol fins al suport de l'aplicació, garantint el compliment i la fiabilitat de les dades.

Protecció de la integritat de les dades

Des de la recepció de mostres i l'execució de l'experiment fins a l'emissió d'informes, hem establert un sistema de qualitat complet que compleix els principis GMP i ALCOA+. Mitjançant una revisió professional de dades a diversos-nivells i un mecanisme de control de desviacions (CAPA) sòlid, assegurem fonamentalment un lliurament auditable i d'alta-qualitat per a cada projecte.